Típusai fluoreszcens mikroszkópok
Epifluoresz-cens mikroszkóp ragyog , és gyűjtsük össze a fényt az azonos optika.
Messze a leggyakoribb fluoreszcens mikroszkóp a epifluoreszcens konfigurációt. Egy epifluoreszcens mikroszkóppal , egy fényforrás - tipikusan egy higanyt vagy xenon lámpával - átragyog egy szűrő , amely kiválasztja egy keskeny régiójában hullámhosszakon. A szűrt fény ragyog rá a mintát a mikroszkóp objektív . A bejövő fény elnyelődik fluorofórok - molekuláris címkéket, fényt bocsátanak ki egy hosszú hullámhosszú fényt elnyelik , amikor a rövidebb hullámhosszon. Fény a fluorofórok , valamint a szórt fény a fényforrás , visszamegy a tárgylencse és az érzékelő vagy a szem . Az út mentén , a másik szűrő kiszűri a megvilágítás fény, így minden, ami maradt az a fluoreszkáló fény a mintából .
Konfokális
Egy epifluoreszcens mikroszkóppal gyűjt fény mindenhol belül a látómező a mikroszkóp . Néhány a gerjesztő fény elnyelődik a fókuszsík előtt a mikroszkóp , néhány a fókuszsík és néhány túl a fókuszsík . Mivel a mikroszkóp összegyűjti a fényt , a kép tartalmazni fog egy éles kép a fény a hangsúly , de azt is , hogy out- of- fókusz fény más régiókban. A konfokális mikroszkóp rögzíti , hogy azáltal a lézerfolt ugyanabban a síkban , mint a mikroszkóp koncentrál . Ezt követően , a lyukra megy előtt a detektor , ahol gátolja a fény, nem jön a mikroszkóp hangsúly . A szkennelés a mintát , a tiszta háromdimenziós képet az objektum lehet elérni.
Multifoton
in fluoreszcens mikroszkóp fény jön molekulák a mintában .
konfokális mikroszkóppal a beállítás nagyon érzékeny . Ha a lézer helyszínen , a mikroszkóp objektív, a gyűjtő optika és a lyukra ki van még a legkisebb összeget, amely a mikroszkóp teljesítménye szenved . A multifoton mikroszkóp kap körül ezt a problémát lézerrel hullámhossz , ami csak fele olyan energikus, mint amilyennek lennie kellene , hogy gerjeszti a fluorofor a mintában. Az egyetlen módja a fluorofórok kap izgatott és bocsátanak ki fluoreszcencia , ha a lézerfény elég világos , hogy a két részecske a fény - fotonok - sztrájk a fluorofórral egy nagyon rövid idő alatt . Ez történik , ha a lézer fókuszált , hogy egy nagyon kis helyen . Tehát az egyetlen hely a mintában , ami fényt bocsátanak ki , ahol a lézer fókuszált , amely megtartja a kép szép és tiszta, mert nincs külön háttér fény , hogy megszabaduljon - ami azt jelenti, nem lyukra igazítani .
Total Internal Reflection fluoreszcencia ( TIRF )
egyetlen minta több fluorofórok .
másik módja, hogy nagyon tiszta képek , hogy ellenőrizze, hogy a gerjesztő fény nem jut messzire a mintába. Ha a folt a neuronok , például kerül egy csepp oldat egy tárgylemezre , majd néhány a neuronok csatlakozik az üveg felületén. A teljes belső visszaverődés fluoreszcencia ( TIRF ) mikroszkóp a fény irányul oldalirányban a tárgylemezre , így nem nagyon teszik az oldatba tartja a sejteket. De néhány, a fény csak alig szivárog be a megoldás - csak nagyon közel a felület az üveg. Ez azt jelenti, az egyetlen hely , amely fényt bocsátanak ki lesz egy nagyon vékony régió egészen az üveg felületén . Valami , mint a neuronok , amikor annyi érdekes dolog történik felszínén a sejtek , ez a technika nagyon hatékony lehet .
Super Resolution
mikroszkópok - beleértve a fluoreszcens mikroszkópok - korlátozza a fizika , hogy szabályozza a fény terjedését . Az egyik alapvető szabály, hogy a fókuszált fényfolt csak kap olyan kicsi - , és nem kisebb. A látható fény , hogy a mérete körülbelül 200 nanométer , vagy 200 milliárdod méter . De egyes molekulák csak néhány nanométer nagyságú , így rengeteg érdekes funkciók, amelyek alacsonyabb, mérethatár , az úgynevezett diffrakciós limit . A tudósok fejlesztése " szuper- felbontású " technikák besurranó körül ezt a határt . Strukturált megvilágítás mikroszkópia (SIM ) és az indukált emisszió kimerülése ( STED ) mikroszkópia, például mindkettő fluoreszcencia mikroszkópos módszerekkel , amelyek korlátozzák a méret a fénykibocsátó helyszínen csökken a mérete a gerjesztő fényfolt .